Это важно.

Мы предлагаем удобный сервис для тех, кто хочет купить – продать: земельный участок, дом, квартиру, коммерческую или элитную недвижимость в Крыму. http://crimearealestat.ucoz.ru/ Перепечатка материалов разрешена только при условии прямой гиперссылки http://allmedicine.ucoz.com/

Поиск

Реклама

Statistics


Онлайн всего: 1
Гостей: 1
Пользователей: 0

Нас смотрят

free counters

Ссылки.

Мы предлагаем удобный сервис для тех, кто хочет купить – продать: земельный участок, дом, квартиру, коммерческую или элитную недвижимость в Крыму. http://crimearealestat.ucoz.ru/

Чат

Физиология и принципы культивирования микроорганизмов.
Метаболизм микроорганизмов.
Для роста и размножения микроорганизмы нуждаются в веществах, используемых для построения структурных компонентов клетки и получения энергии. Метаболизм (т.е. обмен веществ и энергии) имеет две составляющих- анаболизм и катаболизм. Анабо-лизм- синтез компонентов клетки (конструктивный обмен). Катаболизм- энергетический обмен, связан с окислительно- восстановительными реакциями, расщеплением глюкозы и других органических соединений, синтезом АТФ. Питательные вещества могут поступать в клетку в растворимом виде (это характерно для прокариот)- осмотрофы, или в виде от-дельных частиц- фаготрофы.
Основным регулятором поступления веществ в бактериальную клетку является ци-топлазматическая мембрана. Существует четыре основных механизма поступления ве-ществ: -пассивная диффузия- по градиенту концентрации, энергонезатратная, не имеющая субстратной специфичности;
- облегченная диффузия- по градиенту концентрации, субстратспецифичная, энерго-незатратная, осуществляется при участии специализированных белков пермеаз;
- активный транспорт- против градиента концентрации, субстратспецифичен (спе-циальные связывающие белки в комплексе с пермеазами), энергозатратный (за счет АТФ), вещества поступают в клетку в химически неизмененном виде;
- транслокация (перенос групп)- против градиента концентрации, с помощью фос-фотрансферазной системы, энергозатратна, вещества (преимущественно сахара) поступа-ют в клетку в форфорилированном виде.
Основные химические элементы- органогены, необходимые для синтеза органичеких соединений- углерод, азот, водород, кислород.
В зависимости от источника потребляемого углерода микробы подразделяют на ау-тотрофы (используют CO2) и гетеротрофы (используют готовые органические соеди-нения). В зависимости от источника энергии микроорганизмы делят на фототрофы (энергию получают за счет фотосинтеза- например, цианобактерии) и хемотрофы (энер-гия добывается за счет химических, окислительно- восстановительных реакций). Если при этом донорами электронов являются неорганические соединения, то это литотрофы, если органические- органотрофы. Если бактериальная клетка в состоянии синтезировать все необходимые для жизнедеятельности вещества, то это прототрофы. Если бактерии нуж-даются в дополнительных веществах (факторах роста), то это ауксотрофы. Основными факторами роста для труднокультивируемых бактерий являются пуриновые и пиримиди-новые основания , витамины, некоторые (обычно незаменимые) аминокислоты, кровяные факторы (гемин) и др.
Дыхание микроорганизмов.
Путем дыхания микроорганизмы добывают энергию. Дыхание- биологический про-цесс переноса электронов через дыхательную цепь от доноров к акцепторам с образовани-ем АТФ. В зависимости от того, что является конечным акцептором электронов, выделя-ют аэробное и анаэробное дыхание. При аэробном дыхании конечным акцептором элек-тронов является молекулярный кислород (О2), при анаэробном- связанный кислород ( -NO3 , =SO4, =SO3).
Примеры.
  О2
Аэробное дыхание донор водорода H2O
Анаэробное дыхание
нитратное окисление NO3
(факультативные анаэробы) донор водорода N2
сульфатное окисление SO4
(облигатные анаэробы) донор водорода H2S
По типу дыхания выделяют четыре группы микроорганизмов. 
1.Облигатные (строгие) аэробы. Им необходим молекулярный (атмосферный) ки-слород для дыхания.
2.Микроаэрофилы нуждаются в уменьшенной концентрации (низком парциальном давлении) свободного кислорода. Для создания этих условий в газовую смесь для культи-вирования обычно добавляют CO2, например до 10- процентной концентрации.
3.Факультативные анаэробы могут потреблять глюкозу и размножаться в аэробных и анаэробных условиях. Среди них имеются микроорганизмы, толерантные к относитель-но высоким (близких к атмосферным) концентрациям молекулярного кислорода - т.е. аэ-ротолерантные, а также микроорганизмы которые способны в определенных условиях пе-реключаться с анаэробного на аэробное дыхание.
4.Строгие анаэробы размножаются только в анаэробных условиях т.е. при очень низких концентрациях молекулярного кислорода, который в больших концентрациях для них губителен. Биохимически анаэробное дыхание протекает по типу бродильных процес-сов, молекулярный кислород при этом не используется.
Аэробное дыхание энергетически более эффективно (синтезируется большее коли-чество АТФ).
В процессе аэробного дыхания образуются токсические продукты окисления (H2O2- перекись водорода, -О2 - свободные кислородные радикалы), от которых защищают спе-цифические ферменты, прежде всего каталаза, пероксидаза, пероксиддисмутаза. У ана-эробов эти ферменты отсутствуют, также как и система регуляции окислительно- восста-новительного потенциала (rH2). 
Основные методы создания анаэробных условий для культивирования микроорга-низмов.
1.Физический- откачивание воздуха, введение специальной газовой безкислородной смеси (чаще- N2- 85%, CO2- 10%, H2- 5%).
2.Химический- применяют химические поглотители кислорода.
3.Биологический- совместное культивирование строгих аэробов и анаэробов (аэробы поглощают кислород и создают условия для размножения анаэробов).
4.Смешанный- используют несколько разных подходов.
Необходимо отметить, что создание оптимальных условий для строгих анаэробов- очень сложная задача. Очень непросто обеспечить постоянное поддержание безкислород-ных условий культивирования, необходимы специальные среды без содержания раство-ренного кислорода, поддержание необходимого окислительно- восстановительного по-тенциала питательных сред, взятие и доставка, посев материала в анаэробных условиях.
Существует ряд приемов, обеспечивающих более подходящие условия для анаэро-бов- предварительное кипячение питательных сред, посев в глубокий столбик агара, за-ливка сред вазелиновым маслом для сокращения доступа кислорода, использование гер-метически закрывающихся флаконов и пробирок, шприцев и лабораторной посуды с инертным газом, использование плотно закрывающихся эксикаторов с горящей свечой. Используются специальные приборы для создания анаэробных условий- анаэростаты. Од-нако в настоящее время наиболее простым и эффективным оборудованием для создания анаэробных и микроаэрофильных условий является система “Газпак” со специальными газорегенерирующими пакетами, действующими по принципу вытеснения атмосферного воздуха газовыми смесями в герметически закрытых емкостях.
Основные принципы культивирования микроорганизмов на питательных средах.
1.Использование всех необходимых для соответствующих микробов питательных компонентов.
2.Оптимальные температура, рН, rH2, концентрация ионов, степень насыщения ки-слородом, газовый состав и давление.
Микроорганизмы культивируют на питательных средах при оптимальной темпера-туре в термостатах, обеспечивающих условия инкубации. 
По температурному оптимуму роста выделяют три основные группы микроорганиз-мов.
1.Психрофилы- растут при температурах ниже +20 градусов Цельсия.
2.Мезофилы- растут в диапозоне температур от 20 до 45 градусов (часто оптимум- при 37 градусах С).
3.Термофилы- растут при температурах выше плюс 45 градусов.
Краткая характеристика питательных сред.
По консистенции выделяют жидкие, плотные (1,5- 3% агара) и полужидкие (0,3- 0,7 % агара) среды. 
Агар- полисахарид сложного состава из морских водорослей, основной отвердитель для плотных (твердых) сред. В качестве универсального источника углерода и азота при-меняют пептоны- продукты ферментации белков пепсином, различные гидролизаты- мясной, рыбный, казеиновый, дрожжевой и др.
По назначению среды разделяют на ряд групп:
- универсальные (простые), пригодные для различных нетребовательных микроорга-низмов (мясо- пептонный бульон- МПБ, мясо- пептонный агар- МПА);
- специальные- среды для микроорганизмов, не растущих на универсальных средах (среда Мак- Коя на туляремию, среда Левенштейна- Иенсена для возбудителя туберкулеза);
- дифференциально- диагностические- для дифференциации микроорганизмов по ферментативной активности и культуральным свойствам ( среды Эндо, Плоскирева, Левина, Гисса);
- селективные (элективные)- для выделения определенных видов микроорганизмов и подавления роста сопутствующих- пептонная вода, селенитовая среда, среда Мюллера.
По происхождению среды делят на естественные, полусинтетические и синтетиче-ские.
Рост и размножение микроорганизмов.
Бактериальные клетки размножаются в результате деления. Основные стадии раз-множения микробов в жидкой среде в стационарных условиях:
- лаг- фаза (начальная стадия адаптации с медленным темпом прирости биомассы бактерий);
- экспоненциальная (геометрического роста) фаза с резким ростом численности по-пуляции микроорганизмов (2 в степеии n);
- стационарная фаза (фаза равновесия размножения и гибели микробных клеток);
- стадия гибели - уменьшение численности популяции в связи с уменьшением и от-сутствием условий для размножения микроорганизмов (дефицит питательных веществ, изменение рH, rH2, концентрации ионов и других условий культивирования).
Данная динамика характерна для периодических культур с постепенным истощением запаса питательных веществ и накоплением метаболитов.
Если в питательной среде создают условия для поддержания микробной популяции в экспоненциальной фазе- это хемостатные (непрерывные) культуры.
Характер роста бактерий на плотных и жидких питательных средах: сплошной рост, образование колоний, осадок, пленка, помутнение.
Чистая культура- популяция одного вида микроорганизмов.
Основные принципы получения чистых культур: механическое разобщение, рассев, серийные разведения, использование элективных сред, особых условий культивирования (с учетом устойчивости некоторых микробов к определенным температурам, кислотам, щелочам, парциальному давлению кислорода, рН и мн.др).





















Раскрутка сайта - регистрация в каталогах PageRank Checking Icon Яндекс цитирования